研究用經(jīng)Ni2+-NTA金屬螯合層析柱純化后獲得純化的重組N蛋白作為抗原檢測(cè)試劑,抗重組N蛋白的單克隆抗體作為抗體診斷試劑,用非離子去污劑暴露出TGEV的核衣殼蛋白,利用競(jìng)爭(zhēng)原理針對(duì)糞便中的TGEV建立了一種快速的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法。并對(duì)方法中封閉液的選擇及工作條件進(jìn)行了確定,結(jié)果表明0.5%聚乙烯醇在37℃封閉2h效果。該方法對(duì)感染TGEV的20頭份仔豬的糞便樣品進(jìn)行檢測(cè),并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)仔豬糞便樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析,確定了陽(yáng)性值判定標(biāo)準(zhǔn)為:在陰性對(duì)照（N）OD492nm>0.9情況下,抑制率大于14.5%為陽(yáng)性。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA對(duì)豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒等腸道病毒的檢測(cè)均為陰性反應(yīng)。 以TGEV TH-98株的強(qiáng)毒株人工服感染未進(jìn)初乳的初生仔豬,24h后收集仔豬糞便樣品,用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA和RT-PCR方法分別對(duì)糞便進(jìn)行病原體檢測(cè),結(jié)果表明,在仔豬感染62h以后,用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法可檢測(cè)到在腸道內(nèi)擴(kuò)增的TGEV;RT-PCR方法在感染后57h即可檢測(cè)到TGEV。RT-PCR方法比間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA要早近5h檢測(cè)到TGEV。對(duì)63h以后的糞便作10倍稀釋時(shí),間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法可檢測(cè)到糞便中的TGEV,而RT-PCR方法對(duì)糞便作20倍、40倍稀釋時(shí),仍可檢出TGEV。表明RT-PCR方法較間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法敏感。